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제품특징
- 2 x premix 타입의 1 step qRT-PCR kit (Dual-Labeled Probe 검출법)
- 탁월한 반응성으로 반응 억제물질을 포함한 샘플, crude 샘플 증폭에도 최적
- Carryover contamination 방지를 위한 UNG plus 버전 선택 가능
제품설명
본 제품은 Dual Labeled Probe법의 1 step Real Time RT-PCR 전용 premix 시약이다.본 제품은 qPCR을 수행하기 위한 역전사효소와 PCR 효소 및 반응 buffer가 premix화 되어 있어 하나의 튜브 내에서 한번에 RT-PCR 반응을 진행할 수 있어, 조작이 간편하고 contamination의 위험을 낮출 수 있다.역전사 효소는 내열성이 높고, 반응 억제물질이 존재하여도 효율적으로 cDNA 합성이 가능한 PrimeScript RTase III 를 사용하고 있다.또한 본 제품은 복수의 반응을 동시에 실시하는 multiplex Real Time RT-PCR 반응에도 적용할 수 있다.반복적인 PCR 반응에서 발생 위험이 높은 carryover contamination을 방지하기 위해 UNG를 포함한 One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix, with UNG (Code RR601S/A/B)도 판매하고 있다. 본 제품을 이용하면 RNA/DNA virus의 조기 검출이나 mRNA 발현해석을 좀더 간편하고 정확하게 진행할 수 있다.본 제품은 Thermal Cycler Dice®Real Time System 장치에 최적화되어 있지만, 주요 Real Time PCR 장치에도 사용할 수 있음을 확인하였다.
- Thermal Cycler Dice Real Time System III 시리즈 (Code TP950 외)
- Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific)
- LightCycler 96 System (Roche Diagnostics)
- CFX96 Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad) 등
주의: Intercalater (TB Green™)법을 이용한 1 step Real Time RT-PCR에는 아래의 제품을 추천합니다.
- One Step TB Green™ PrimeScript™ PLUS RT-PCR Kit (Perfect Real Time) (Code RR096A)
- One Step TB Green™ PrimeScript™ RT-PCR Kit II (Perfect Real Time) (Code RR086A)
내용
One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix (Code RR600A, 200회; 25㎕ 반응 시)
구성품명 | 용량 | |
1. | One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix (2×) | 625 ㎕ × 4 |
2. | RNase Free Water | 1.25 ㎖ × 2 |
3. | ROX Reference Dye (50×conc.)* | 100 ㎕ |
4. | ROX Reference Dye II (50×conc.)* | 100 ㎕ |
One Step PrimeScript III RT-qPCR Mix, with UNG (Code RR601A, 200회; 25㎕ 반응 시)
구성품명 | 용량 | |
1. | One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix, with UNG (2×) | 625 ㎕ × 4 |
2. | RNase Free Water | 1.25 ㎖ × 2 |
3. | ROX Reference Dye (50×conc.)* | 100 ㎕ |
4. | ROX Reference Dye II (50×conc.)* | 100 ㎕ |
제품 특징
- One Step RT-PCR 방법으로 RNA바이러스 등의 해석을 신속 정확하게 할 수 있다.
- 본 제품은 다양한 반응억제물질에 높은 저항성을 나타내므로, 간이 핵산추출 시약을 이용하여 추출한 crude RNA 샘플에서도 Real Time RT-PCR 분석이 가능하다.＊다만, 검출 불능일 경우나, 보다 정밀한 안정된 해석 결과를 필요로 하는 경우에는 순도 높은 RNA샘플을 이용한다.배양 세포나 조직 샘플의 고순도 total RNA의 조제 시 권장 제품:TaKaRa MiniBEST Universal RNA Extraction Kit (Code 9767A):RNAiso Plus (Code 9108/9109)
보존 -20℃
반응억제물질에 대한 내성실험 예
[반응저해 물질에 대한 내성 테스트]
그림 1. 반응 억제물질에 대한 내성 시험다섯 종류의 반응 억제물질을 반응 용액에 첨가하여 One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix, Takara 기존 제품 및 타사 제품의 저해 물질에 대한 내성을 테스트하였다. One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix는 "첨가 없음"과 Ct값의 차이가 적고 각종 반응 저해물질에 대한 내성이 높은 것으로 나타났다.
그림 2. Multiplex 분석에서의 재현성Human HeLa Cell Total RNA 1 pg~100 ng을 주형으로 One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix를 이용해ACTB,GAPDH,PPIA,YWHAZ유전자의 multiplex 발현 해석을 실시하였다. 모든 타겟에서 R2>0.99를 충족시켰다.
그림 3. Human ACTB 유전자 발현 해석에서의 재현성 확인Human HeLa Cell Total RNA (Code 636543) 1 pg ~1 ㎍을 주형으로 One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix, with UNG를 이용하여 ACTB유전자 발현 해석을 3일간 나누어 진행하였다. 그 결과, One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix, with UNG은 높은 직선성 (Rsq: 1)을 가지며 안정된 증폭 효율 (Eff.
92.5%)를 나타내었다.
