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제품특징
□ 제품설명
효소에 잔존하는 DNA를 극한까지 억제한 PCR 시약TaKaRa Taq™HS Low DNA
● 저 복제 유전자의 특이적 PCR증폭이 가능
● 독자적 기술을 이용하여 숙주 대장균 유래 DNA 혼입을 극한까지 억제
● 업그레이드 효소 사용으로 기존의 고속 타입보다 높은 반응성 실현
● dNTP와 Mg2+을 포함한 2 x premix 시약
Takara Bio의 정제 기술과DNA불활성화 처리에 의해 PCR의 주형이 될 수 있는 효소 조제 후 남아 있는 숙주 대장균유래 DNA나 기타 제조 공정에서 투입한 원료 유래 DNA를극한까지 억제한 premix PCR시약이다. 신장 속도와특이성을 높인 개량형 Taq DNA polymerase를 사용함으로써 고감도로 특이적인 PCR증폭을 신속히 실시할 수 있다. 이 효소는 상온에서 DNA polymerase활성을 억제하는 monoclonal Ab를 첨가한 hot start PCR효소로 PCR반응 전 primerdimer 등에 기인한 비특이적 증폭을억제할 수 있다. 이 항체는 PCR의 최초의 변성 단계에서변성하기 위해 특별한 활성화 단계는 필요 없다.또 반응 구성요소가 미리 섞인 premix면서 상온에서의 신속한 반응액 조제가 가능하다.이 효소는 5"→ 3"exonuclease 활성과 3"→ 5"exonuclease 활성을 갖지 않는다.
□ 내용 (20 ㎕ 반응 계, 100회)
TaKaRa Taq™ HS Low DNA (2x) | 1,000 ㎕ |
dH2O for Low DNA | 1,000 ㎕ |
□ 보존
-20 ℃
□ 기원
Escherichia coli carrying a plasmid that encodes the Thermus aquaticus DNApolymerase gene
□ 일반적 PCR 반응 조성(Total 20 ㎕ 반응 계)
TaKaRa Taq HS Low DNA | 10 ㎕ |
Template | < 100 ng |
Primer 1 | 0.2 μM* (final conc.) |
Primer 2 | 0.2 μM* (final conc.) |
dH2O for Low DNA | Up to 20 ㎕ |
주) 반응액의 실온 조제도 가능하지만 시약은 반드시 얼음에 놓고 사용한다.* Ramp temperature speed가 5 ℃ 이상의 고속 thermal cycler를 이용하는 경우 primer 농도를 0.6 μM로 설정한다.
□ PCR 조건
*2 변성온도는 반드시 94 ℃로 설정해주세요. 변성온도를 95 ℃이상으로 설정하면효소 불활성화에 의해 반응성 저하가 발생합니다.*3 40 cycles이 넘는 증폭은 권장하지 않습니다.*4 Tm 근사 계산식으로 계산한 Tm값이 55 ℃ 이하의 경우(Nearest Neighbor법으로 계산한 Tm값이 60℃ 이하의 경우)는
3 step법으로 진행하세요.
□ 주의
본 제품은 기존 일반적인 PCR 효소에 비해 매우 적은 template량의 증폭에 대응하는 PCR효소로 미생물 검출을 목적으로하는 경우, 반응 장치에 혼입된 미량의 환경 세균의 DNA를주형으로 증폭하는 경우가 있습니다. 그러한 경우, PCR cycles수를 줄이고 primer 설계를 변경할 것을 추천합니다.
□ PCR 산물에 대해
TaKaRa Taq HS Low DNA를 이용해 증폭된 PCR산물의 대부분은 3"말단에 A가 1염기 부가되어 있다. 따라서 그PCR산물을 그대로 T-Vector에 cloning 할수 있다. 또 말단을 평활화하고 인산화하여 평활 말단의 벡터에 cloning할 수도 있다.
