□ 제품설명
AMV (Avian Myeloblastosis Virus) 유래의 역전사 효소 AMV RTase XL에 의한 RNA로부터 cDNA 합성, 그리고 TaKaRa Ex Taq HS에 의한 cDNA 합성을 한개의 튜브 내에서 실시할 수 있다. 본 제품은 RNA로부터의 cDNA 합성과 cDNA 증폭에 필요한 모든 시약으로 구성한 kit이다. AMV RTase XL는 반응 온도를 높게 설정할 수 있기 때문에 (42~ 60℃) 긴 strand의 cDNA 합성 뿐만아니라 복잡한 2차 구조를 가지기 쉬운 RNA의 역전사 반응에도 유효하다. PCR 증폭에 사용되는 TaKaRa Ex Taq HS는 Hot Start PCR용 효소이기 때문에 반응액 조제시의 misannealing이나 primer dimer에서 유래하는 비특이적 증폭을 막을 수 있어 특이성의 높은 PCR 증폭이 가능하다. Oligo dT-Adaptor Primer는 poly(A)＋RNA의 3＇말단부터 cDNA를 높은 효율로 합성할 수 있도록 설계되어 있어 3"-RACE법으로 미지의 3" 말단의 증폭을 효과적으로 실시할 수 있다.
□ Kit의 내용(100회분)*1
| AMV Reverse Transcriptase XL*2(5 U/ul) | 50 ul |
| RNase Inhibitor(40 U/ul) | 25 ul |
| Random 9 mers(50 pmol/ul) | 50 ul |
| Oligo dT-Adaptor Primer(2.5 pmol/ul) | 50 ul |
| RNase Free dH2O | 1 ml |
| TaKaRa Ex Taq HS(5 U/ul) | 25 ul |
| M13 Primer M4(20 uM) | 50 ul |
| 10 × RT Buffer*3 | 1 ml |
| 5 × PCR Buffer | 1 ml |
| dNTP Mixture (각 10 mM) | 150 ul |
| MgCl2(25 mM) | 1 ml |
| Control F-1 Primer(20 pmol/ul)*4 | 25 ul |
| Control R-1 Primer(20 pmol/ul)*5 | 25 ul |
| Positive Control RNA(2×105 copies/ul) | 25 ul |
*1 [10 ul 역전사반응 → 50 ul PCR 반응]의 100회분*2 Life Sciences사 제품입니다.*3 100 mM Tris-HCl(pH8.3), 500 mM KCl*4 Positive Control RNA용 upstream primer*5 Positive Control RNA 용 downstream primer*6 pSPTet3 Plasmid 전사 poly(A)+ RNA
□ 보존 -20℃
□ 특징
| RN Template | Full length |
| 증폭 사이즈 | 최소 5 kbp 정도 증폭가능 |
| 역전사효소 | AMV Reverse Transcriptase XL(42 ~ 60℃에서 역전사가능） |
| DNA Polymerase | TaKaRa Ex Taq HS |
| RNase Inhibitor | 필요(Kit내 포함) |
| 1st strand cDNA 합성 primer | Random 9 mers, Oligo dT-Adaptor Primer, 특이적 PCR primer 사용가능 |
| 3"-RACE법 | RT 반응때 Oligo dT-Adaptor Primer, PCR 반응시 M13 M4 Primer를 사용하여 3"-RACE법에 사용가능 |
| 조작 | 하나의 tube에서 반응가능. 열처리로 역전사 효소의 활성을 실활시킨 후 PCR 반응 |
