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제품특징
□ 제품설명
본 제품은 RNA를 cDNA로 변환한 후에 PCR을 실시하기 위한 2 Step RT-PCR Kit로 AMV (Avian Myeloblastosis Virus) 유래의 역전사효소에 의해 RNA로 부터 cDNA 합성 그리고, TaKaRa LA Taq에 의한 cDNA의 증폭을 한 개의 tube 내에서실시할 수 있다.Oligo-dT Adaptor Primer는 poly(A)+ RNA의 3、말단으로부터 아주 높은 효율로 cDNA를 합성할 수 있도록 설계되어 있다. 따라서 3、- RACE법에 의한 미지의 3’말단의 증폭에 용이하다.
□ 특징
| RNA template | 모든 RNA |
| 증폭사이즈 | 12kb라지 증폭가능 |
| 역전사효소 | AMV Reverse Transcriptase XL (42~60℃에서 역전사가능) |
| DNA Polymerase | TaKaRa LA Taq |
| RNase Inhibitor | Kit에 포함 |
| 1st strand cDNA합성 | Random 9 mers, |
| 합성 Primer | Oligo dT- Adaptor Primer특이적 하류 primer 사용가능 |
| 3’- RACE법 | RT 반응 시 Oligo dT-Adaptor Primer, PCR 반응 시 M13 M4 Primer를 사용하므로써 3’- RACE법이 가능 |
| 조작 | 1개의 tube 내에서 반응가능, 열처리하여 역전사 효소 활성을 실활시킨 후 PCR한다. |
□ 내용 (100 회) *1
AMV Reverse Transcriptase XL*2 (5 U/㎕) | 50 ㎕ |
RNase Inhibitor (40 U/㎕） | 25 ㎕ |
Random 9 mers (50 pmol/㎕) | 50 ㎕ |
Oligo dT-Adaptor Primer (2.5 pmol/㎕) | 50 ㎕ |
RNase Free dH2O | 1 ㎖ |
TaKaRa LA Taq (5 U/㎕)㎕) | 25 ㎕ |
M13 Primer M4 (20μM) | 50 ㎕ |
10× RNA PCR Buffer *3 | 120 ㎕ |
10× LA PCR Buffer II (Mg2＋ free) | 5000 ㎕ |
dNTP Mixture (각 10 mM) | 150㎕ |
MgCl2 (25 mM) | 1㎕ |
Control F-1 Primer (20 pmol/㎕) (Positive Control RNA downstream primer) | 25㎕ |
Control R-1 Primer (20 pmol/㎕) (Positive Control RNA upstream primer) | 25㎕ |
Positive Control RNA (2×105 copies/㎕ )(pSPTet3 plasmid의 전사 poly(A)＋RNA) | 25㎕ |
*1 [10 ㎕ 역전사반응 → 50 ㎕ PCR반응]의 100회분*2 Life Sciences사 제조품이다.*3 100mM Tris-HCI (pH8.3), 500mM KCI.
