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제품특징
□ 제품 설명
PrimeScript High Fidelity RT-PCR Kit은 total RNA 혹은 mRNA로부터 매우 정확하게 cDNA를 합성하기 위한 RT-PCR용 제품이다. 본 제품의 역전사 반응에는 M-MLV 유래의 RTase를 기초로 다카라바이오가 독자적으로 개발한 역전사효소 PrimeScript RTase를, PCR에는 최고 정확도의 High Fidelity PCR 효소인 PrimeSTAR Max DNA Polymerase를 이용하고 있다. PrimeSTAR Max는 최고 수준의 정확성과 Taq DNA Polymerase의 높은 증폭 효율을 겸비한 premix mix type의 효소로, 다양한 주형량에 대한 적응성을 향상시켜 cDNA 클로닝 등 정확성이 필요한 중요한 반응에 사용할 수 있다. 본 제품의 표준 프로토콜인 2-step RT-PCR에서는 다음과 같은 특징을 나타낸다.
● 효율적으로 정확성이 높은 RT-PCR 증폭 산물을 얻을 수 있다.
● 표준적인 역전사 반응온도(42℃)에서 고차구조를 가진 주형 RNA를 이용한 반응에도 뛰어난 신장성을 나타낸다.
● 반응에 사용할 수 있는 total RNA 양의 범위가 매우 넓고, 사용하기 쉽다.
본 제품의 프로토콜을 일부 변경하면, 1 step RT-PCR에도 이용가능하다.
□ 형상
(50회용)*1
| 1. | PrimeScript RTase(for 2 step) | 25 μl |
| 2. | 5×PrimeScript Buffer | 200 μl |
| 3. | RNase Inhibitor (40 U/μl) | 25 μl |
| 4. | dNTP Mixture (10 mM each) | 50 μl |
| 5. | Oligo dT Primer (2.5 μM) | 50 μl |
| 6. | Random 6 mers (20 μM) | 50 μl |
| 7. | PrimeSTAR Max Premix (2×) | 625 μl×2 |
| 8. | Control F-1 Primer*2 (20 μM) | 10 μl |
| 9. | Control R-1 Primer*3 (20 μM) | 10 μl |
| 10. | Positive Control RNA (2×105 copies/μl) | 20 μl |
| 11. | RNase Free dH2O | 1 ml |
*1 [역전사 반응 20 μl → PCR 반응 50 μl] 경우의 50회분*2 Positive Control RNA upstream sense primer*3 Positive Control RNA downstream antisense primer
□ 보존
- 20℃＜주의＞PrimeSTAR Max Premix(2×)는 10회 정도의 동결 융해에서는 활성 저하를 볼 수 없었지만, 반복적인 동결 융해에 의한 활성 저하를 막기 위해, 일단 융해 후는 PCR 튜브에 25 μl씩 분주해 - 20℃으로 보존하는 것을 추천 한다.
□ 특징
2 step RT-PCR(표준 프로토콜)의 경우
RNA template | 전반적으로 적용가능 |
증폭 사이즈 | 6 kb에서 양호한 증폭 확인 |
역전사효소 | PrimeScriptRTase(최적 반응온도:42℃) |
DNAPolymerase | PrimeSTARMax DNA Polymerase(2×premix type) |
RNaseInhibitor | 필요(제품내 포함) |
1ststrand cDNA합성용 프라이머 | Random6 mers, Oligo dT Primer, specific primer 중 선택가능 |
1 step RT-PCR(표준 프로토콜)의 경우
RNA template | 전반적으로 적용가능 |
증폭 사이즈 | 6kb에서 증폭 확인 |
역전사효소 | PrimeScriptRTase(50 ℃에서 반응) |
DNAPolymerase | PrimeSTARMax DNA Polymerase(2×premix type) |
RNaseInhibitor | 필요(제품내 포함) |
1ststrand cDNA합성용 프라이머 | Specificprimer(PCR 반응시 사용하는 antisense primer) 사용 주：Random primer나 Oligo dT primer 사용 불가 |
반응 | 1개의 튜브내에서 연속적으로 RT-PCR를실시한다 |
