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abfrontier/Guide-it Genotype Confirmation Kit/Guide-it Genotype Confirmation Kit, 100 Rxns/632611
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제품특징
□ 특징
● Genome Editing으로 생성된 Monoallelic, biallelic indel 동정
● 재조합 Cas9 nuclease와 sgRNA로 in vitro cleavage를 이용하여 쉽게 Genotyping
● target genomic DNA를 세포로부터 direct PCR하여 Genotyping 가능
□ 제품설명
CRISPR/Cas9 genome editing (크리스퍼 게놈편집)은 타겟 유전자에 하나의 allele (monoallelic) 또는두개의 allele (biallelic) 변이를 생성하는 것으로 알려져 있다. Guide-it Genotype Confirmation Kit (Code 632611)는Genome Editing 후의 세포 클론에서 변이 유전자를 간편하게Genotyping할 수 있는 제품으로, 한쪽 allele변이 (monoallelic), 대립 allele 변이 (biallelic)를 구분할 수 있을 뿐만 아니라, Wild type(unchanged) 클론까지 구분할 수 있다. Cas9과 single guide RNA (sgRNA)를 처리하여 게놈편집을 시행한 세포에서 타겟유전자를 direct PCR하여 증폭된 증폭산물 (amplicon)을 tube 내에서 재조합 Cas9과sgRNA를 처리하여 in vitro cleavage를 수행한다. 그 후, 절단산물을 Agarosegel 전기영동을 시행함으로써 genotype을 판정할 수 있다. * 본 제품에는 sgRNA를합성하는 시약이 포함되어있지 않습니다. In vitro sgRNA 합성은 Guide-itsgRNA In Vitro Transcription Kit (Code 631438)을 이용하십시오. 
그림1. Guide-it Genotype Confirmation Kit의 원리 및 Workflow.
그림2. in vitro Cas9/sgRNA 절단에 의한 Genotype 판정
그림3. (그림 A) Genome Editing을 수행한 세포 (HEK293 Cells)의 Genotyping 결과 (그림 B) 그림 A로부터획득, 선택한 클론의 시퀀싱 분석 결과
□ 적용
● CRISPR/Cas9 gene editing
● Identification of monoallelicand biallelic mutations after CRISPR/Cas9 gene editing
□ 구성품
● Extraction Buffer 1
● Extraction Buffer 2
● Guide-it Recombinant Cas9 Nuclease(500 ng/μ l)
● 15X Cas9 Reaction Buffer
● Terra PCR Direct Polymerase Mix(1.25 U/μ l)
● 2X Terra PCR Direct Buffer (with Mg2+, dNTP)
● RNase-Free Water
● 15X BSA
● Monoallelic Mutant Control Fragment(20 ng/μ l)
● Biallelic Mutant Control Fragment(20 ng/μ l)
● Control Fragment(20 ng/μ l)
● Control sgRNA(50 ng/μ l)
□ 보존
-20℃
