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제품특징
□ 농도 15~40 U/㎕
□ 형상
200 mM | Potassium Phosphate (pH7.2) |
2 mM | DTT |
0.2% | Triton X-100 |
50% | Glycerol |
□ 보존
- 80。C 동결보존 (동결융해 반복에 따른 활성저하는 없으나 가능한 한 피할 것)- 단기간인 경우 -20℃에 보존 가능.
□ 첨부 Buffer 조성 (cDNA 합성용, 10×/ 5×)
250 mM | Tris-HCl (pH8.3) |
500 mM | KCl |
20 mM | DTT |
50 mM | MgCl2 |
* Full length cDNA 합성시에는 첨부 버퍼를 1/10로 희석하여 사용하세요.
□ 기원
Avian myeloblastosis virus (AMV)
□ 제품설명
본 제품은 AMV로부터 고도로 정제한 것이다. 약 10 kb의 긴 RNA (Poly(A)-tailed RNA Ladder (1.4~9.5 kb))를 주형으로 하는 cDNA 합성 반응계에서 40~70% 이상이 역전사되어 그 중 55~80%가 완전한 길이의 cDNA 합성하는 것을 marker에서 확인하였다. 본 제품은 second strand 합성 저해제로써 actinomycin D 이외에, 4 mM의 sodium pyrophosphate도 사용할 수 있는 점과 반응 최적온도가 높은 점에서 MMLV 유래의 역전사효소와 다르다.
□ 활성의 정의
Poly(rA)· oligo(dT)를 각각 주형· 프라이머로 하여 37℃에서, 10분 동안 1 nmol의 dTMP를 합성기질로 사용하는 것을 효소활성
1 U으로 한다.
□ 활성측정용 반응액 조성
50 mM | Tris-HCl (pH8.3) |
40 mM | KCl |
6 mM | MgCl2 |
4 mM | DTT |
0.4 mM | Poly(rA)· oligo(dT)12-18 |
0.5 mM | [3H]dTTP |
□ 품질검정
1. cDNA 합성반응poly(A)-tailed RNA Ladder(1.4~9.5 kb)를 주형으로 하는 cDNA 합성반응에 있어, 주형 DNA의 40%~70% 이상이 역전사
되어 그 중 55%~80%가 완전한 길이이다.2. RNase Assay 15 U의 본 효소와 1㎍ RNA Ladder (1.4~9.5 kb)와 37℃, 2시간 반응하여도 RNA 전기영동 패턴에 변화가 일어나지 않는다.3. DNase Assay50 U의 본 효소와 0.5㎍×174 RFI DNA HaeⅢ단편들을 37℃, 1시간 반응하여도 전기영동 패턴에 변화가 일어나지 않는다.
□ 용도
- 1st strand cDNA의 합성- RNA-PCR- cDNA probe 조제