□ 특징

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● 목적 단백질을 고발현하는 세포를 항생제나 형광을 이용해 빠르게 선별

● Bicistronic expression으로 stable clone을 빠르고, 정확하게 선별

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pIRES Bicistronic Expression Vector는 목적 단백질을 발현하는 clone을 빠르고 효과적으로 선별할 수 있게 한다. 이 vector는 하나의 promoter로 목적 유전자와 선별 마커 (Figure 1) 또는 Living Colors Fluorescent Protein (Figure 2) 모두를 발현할 수 있는 cassette를 가지고 있다. 그러므로 실질적으로 마커를 발현하는 세포는 목적 유전자를 발현한다. 이런 vector를 이용하면 최소한의 선별과정으로 목적 단백질을 고발현하는 clone을 선별할수 있다.

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□ IRES Bicistronic Expression

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뇌심근염바이러스 (encephalomyocarditis virus (ECMV))의 IRES (internal ribosome entry site)는 하나의 mRNA로부터 2 개의 ORF (open reading frame)를 번역하도록 한다 (1, 2). Ribosome은 bicistronic mRNA의 5＇-말단에서부터 목적 유전자를 번역하며, 선별 마커 또는 형광 reporter를 번역하기 위하여 IRES에 결합한다. 모든 pIRES Antibiotic Selection Vector는 cloning된 유전자의 번역 개시 효율에 비하여 상대적으로 선별 마커의 번역 개시 효율을 감소시키는 부분적으로 결함을 가진 IRES를 포함한다. 이것은 목적 단백질을 고발현하는 세포를 우선적으로 선별할 수 있게 한다 (3).

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□ Living Colors pIRES2 Vectors와 어울리는 유전자 발현

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Living Colors pIRES2 Vector는 완전히 활성화된 IRES 서열을 포함하고 있어 형광단백질을 동등하게 고발현시킬 수 있다. 마커는 융합단백질이기 보다는 개별적인 단백질이기 때문에 목적 단백질의 생물학적 활성에 대한 위험이 거의 없다. pIRES2 vector는 일시적으로 transfection된 세포의 농축이나 형광 강도를 통해 목적 유전자의 발현 수준을 관찰 하는데 유용한다.pEXP-Lib vector는 포유류 세포에서 cDNA library를 발현시키는데 사용할 수 있다. 2 종의 retrovirus용 IRES vector는 transfection하기 힘든 세포에 목적유전자와 형광단백질을 도입하는데 유용하다.

Figure 1. Map of the pIRES Selection Vectors.

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Figure 2. Map of the Fluorescent pIRES2 Bicistronic Expression Vectors.

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Figure 3. Schematic diagram of bicistronic mRNA translation. The internal ribosome entry site (IRES) permits a protein of interest and either an antibiotic resistance marker or fluorescent protein to be translated from the same mRNA. IVS = synthetic intron.

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□ Components & Storage Conditions

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각 제품 구성물과 보관조건은 Certificate of Analysis 를 참조하십시오.

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□ References

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1. Jackson, R. J. et al. (1990) Trends Biochem. Sci. 15:477-483.2. Jang, S. K. et al. (1988) J. Virol. 62:2636-2643.3. Rees, S. et al. (1996) Biotechniques 20:102-110.