□ 특징

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● 형광 현미경 또는 flow cytometry를 이용하여 transfection 된 세포를 빠르게 확인

● 더 빠르고, 안정적으로 clone을 선별하기 위한 bicistronic expression

● 목적 단백질인 untagged protein의 고발현

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Bicistronic vector는 목적 유전자와 fluorescent protein이 모두 단일 mRNA에서 번역되도록 한다 (Figure 1; 1, 2). 각 vector는 tag이 붙어 있지 않은 목적 단백질을 고발현하도록 제작되었다. 따라서, 형광으로 표식된 세포는 거의 100% 가까이 목적 유전자를 발현하고, 이것은 flow cytometry나 형광 현미경을 사용하여 간단하게 선별하여 목적 유전자를 발현하는 세포를 빠르게 확인할 수 있다.IRES와 IRES2에 대한 더 자세한 정보는 홈페이지 (www.clontech.com)에서 확인하십시오.

Figure 1. Translation of two proteins from a Living Colors pIRES2 Vector.

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□ Bidirectional Reporter Vector

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● 하나의 목적 단백질과 하나의 reporter 단백질을 항시적으로 발현

● 녹색이나 적색 또는 chemiluminescent reporter 선택 가능

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Bidirectional vector는 비슷한 수준으로 목적 단백질과 reporter 단백질 (또는 2 개의 목적 단백질)을 항시적으로 발현할 수 있도록 제작되었다. 목적 단백질의 항시적 발현시스템을 위한 vector는 아래에서 목적에 맞게 선택 가능하다.

● 2 개의 목적 단백질 - pBI-CMV1 (Figure 2)

● Monomeric green fluorescent protein AcGFP1 - pBI-CMV2

● 아주 밝은 green fluorescent protein ZsGreen1 - pBI-CMV3

● Red fluorescent protein DsRed2 - pBI-CMV4

● 분비형 chemiluminescent reporter, Metridia luciferase (MetLuc)

pBICMV5(Bidirectional Secreted Luciferase System의 구성품)

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이러한 bidirectional vector를 사용해 stable clone을 만들기 위하여 linearized selection marker나 antibiotic selection marker를 포함하고 있는 vector의 cotransfection을 권장한다.Inducible Bidirectional Vector 또한 이용 가능하며 이 vector에 대한 정보는 page 91에서도 확인 가능하다.

Figure 2. pBI-CMV1 allows the constitutive expression of two proteins of interest. In the other pBI vectors, the “Gene A” position is occupied by a reporter gene.

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□ Components & Storage Conditions

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각 제품 구성물과 보관조건은 Certificate of Analysis 를 참조하십시오.

□ References

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1. Jackson, R. J. et al. (1990) Trends Biochem. Sci. 15(12):477-483.2. Jang, S. K. et al. (1988) J. Virol. 62(8):2636-2643.