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| 선택 | Cat.No. | 제품명 | 가격(VAT별도) | 수량 |
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제품특징
□ 농도 1~3 U/㎕
□ 형상
| 20 mM | Tris-HCl (pH8.0) |
| 100 mM | NaCl |
| 5 mM | CaCl2 |
| 5 mM | MgCl2 |
| 1 mM | EDTA |
| 50% | Glycerol |
□ 보존 -20℃
□ 첨부 Buffer 조성 (5×)
| 40 mM | Tris-HCl (pH8.0) |
| 1,200 mM | NaCl |
| 24 mM | CaCl2 |
| 24 mM | MgCl2 |
| 2 mM | EDTA |
□ 기원
Alteromonas espejiana BAL31
□ 제품설명
본 효소는 해양성 세균 A. espejiana BAL31가 균체외로 생산하는 단일가닥 DNA 특이적인 endonuclease이지만, 단일가닥 DNA가 없으면 이중가닥 DNA에 작용하여 양말단으로부터 동시에 분해하는 5’→ 3’, 3’→ 5’ exonuclease 활성(trimming 활성)을 나타낸다. 최종 산물은 5’-P mononucleotide이다. 본 효소는 분자량 약 83 kDa의〔F〕형과 분자량 약 73 kDa의〔 S〕형이 존재하며,〔 F〕형이 exo/endo의 활성의 비가 10~20배 높다. 두 형에는 exonulcease 활성이 상대적으로 다른것 이외는 반응조건 등의 차이는 확인되지 않는다. BAL31은 F형을 주로하는 S형 nuclease와의 mixture이다.
□ 활성의 정의
열변성 송아지 흉선 DNA를 기질로 하여 30℃, pH8.0의 조건에서 1분 동안 1 ㎍의 가용성 분해물을 생성하는 효소활성을 1 U으로 한다.
□ 활성 측정용 반응액 조성
| 20 mM | Tris-HCl (pH8.0) |
| 600 mM | NaC |
| 12 mM | CaCl2 |
| 12 mM | MgCl2 |
| 1 mM | EDTA |
| 650 ㎍/ml | 기질 DNA |
□ 사용상의 주의
- 단일가닥 DNA endonuclease 활성은 반응온도를 30 → 20℃로 낮추면 1/10 정도까지 떨어지나, dsDNA exonuclease 활성의
잔존은 1/3 정도이다.- Endonuclease 활성은 염농도에 영향받지 않으나 exonuclease 활성은 염농도가 높을수록 저하한다.- Trimming 활성의 최적염농도는 200 mM NaCl 부근으로 이보다 낮으면 무작위적으로 분해할 수 있다.- 분해활성은 염기에 대한 의존성이 높고 GC-rich인 영역(특히 Sma I site)은 분해되기 어려우므로 말단의 제한효소 site를 선택할
필요가 있다.- 반응은 distributive 효소 농도에 의존성이 높고 희석에 대해 직선적 상관은 나타내지 않으며, 효소반응이 너무 빠른 경우는
효소량을 줄이는 것보다는 반응 온도를 낮추는 것이 바람직하다.- 본 효소에 의해 생긴 말단의 평활화율은 10% 정도로 낮고, 라이게이션 효율을 높이기 위해서는 T4 DNA polymerase에 의한
말단의 수복이 필요하다.
□ 용도
- DNA 단편의 양말단에서의 부터의 한정분해 (결실의 제작) (결실의 길이가1,000염기 정도가 적당하다. 그 외의 경우는 Exonuclease III와 S1 nuclease의 조합으로 하는 것이 좋다.)
