□ 농도 100~300 U/㎕

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□ 형상

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□ 보존 -20℃

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(6개월 이상의 장기보존의 경우는 -80℃에서 동결보존)

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□ 첨부 Buffer 조성 (10×)

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□ 기원

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Escherichia coli BE 257/pSGR 3 (B. Weiss박사로부터 공여)

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□ 제품설명

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본 효소는 DNA의 phosphodiester 결합의 가수분해를 촉매함으로써 이중가닥 DNA의 3’- OH 말단으로 부터 5’-mononucleotide를 유리시키는 3’→5’exonuclease이다. DNA의 3’말단이 OH가 아닌 경우는 3’-phosphatase로서, apurinic acid, apyrimidic acid 부위에 대해서는 phosphodiester 결합을 절단하는 AP endonuclease로서 작용하고, RNase H의 활성도 갖는다.본 효소는 dsDNA에 대한 특이성이 극히 높고, 평활말단, 3’-recessed end, 그리고 nicking site로부터 분해가 가능하지만, 3’-돌출말단은 분해하지 않는다(사용상의 주의 참조). 따라서, 다른 말단을 형성하는 제한효소로 2중 절단(double digestion)하므로써 한쪽 방향으로 부터의 분해가 가능하다.최종 생성물은 이중가닥DNA의 상보 DNA와 5’- P mononucleotide 이다.본 효소의 염기서열 특이성은 BAL31 nuclease에 비하여 낮지만, GC rich site에서 반응이 정지하는 빈도가 적기 때문에 DNA의 deletion 제작에 편리하다.

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□ 활성의 정의

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제한효소 처리 송아지 흉선 DNA를 기질로 하여, 37℃, pH8.0에서 30분 동안 1 nmol의 산가용성 분해물을 생성하는 효소활성을

1 U으로 한다.

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□ 활성 측정용 반응액 조성

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□ 순도

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- 5 U의 본 효소와 1 ㎍의 closed circular (RF I) фX174 DNA를 37℃, 1시간반응하여도 DNA의 전기영동 패턴에 변화가 없다.- 50 U의 본 효소와 1 ㎍의 pHSG298-Pst I 분해물을 37℃, 30분간 반응하여도 DNA의 전기영동 패턴에 변화가 없다.

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□ 사용상의 주의

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- 효소의 성질상 DNA 말단이 3’돌출형이라도 그 말단의 형상과 서열에 따라서 기질로써 분해되는 경우가 있다. 분해되는 것이 확인된 제한효소 절단 말단의 예

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1. 염기 돌출형 (Eam1105 I 등)2. 염기 돌출형 (Pvu I, Sac II 등)3. 염기 돌출형 (Sfi I 등)4. 염기 돌출형 (Apa I 절단 말단은 분해되는 것이 확인되어 있다.또 Ban II, BstX I도 서열에 따라서는 분해될 가능성이 있다)

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□ 용도

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- 이중가닥 DNA 단편 부분분해에 의한 DNA polymerase의 기질이 되는 일부단일가닥 DNA의 생성 (생성된 DNA는 dideoxy법에 의한 DNA의 염기서열 결정에 사용이 가능하다)- 단일가닥 DNA 특이적 nuclease (S1 또는 Mung Bean Nuclease)와의 병용에 의한 DNA단편 결실 제작본 효소는 이중가닥 DNA에 고도의 특이성을 갖고 있으므로, 이중가닥 DNA 절단단편 (예를 들면 EcoR I-Pst I 단편)에 대해서는,

한쪽 (EcoR I 쪽)방향에서만의 결실을 제작할 수 있다.- DNA - 단백질의 상호 작용의 해석