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| 선택 | Cat.No. | 제품명 | 가격(VAT별도) | 수량 |
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제품특징
□ 농도 10~50 U/㎕
□ 형상
| 10 mM | Potassium Phosphate (pH7.9) |
| 1 mM | DTT |
| 0.1 mM | EDTA |
| 150 mM | NaCl |
| 50% | Glycerol |
□ 보존 -20℃
□ 첨부 Buffer 조성 (10×)
| 400 mM | Tris-HCl (pH7.5) |
| 60 mM | MgCl2 |
| 20 mM | Spermidine |
| 100 mM | DTT [별첨] |
| 0.1% | BSA [별첨] |
□ 기원
Escherichia coli carrying the plasmid containing phage SP6 RNA polymerase gene
□ 제품설명
본 효소는 5’ → 3’RNA polymerase 활성을 갖으며 SP6 프로모토를 포함하는 이중가닥 DNA를 주형으로 하여 NTP를 기질로 프로모토 하류의 단일가닥 DNA에 상보적인 RNA를 합성한다. SP6 프로모토 서열에 높은 특이성을 나타내고, 다른 생물 유래의 promoter는 인식하지 않는다.
□ 활성의 정의
37℃, pH7.5의 조건에서 1시간 동안 1 nmol의 [3H]GMP를 기질로 하여 산불용성 침전물로 합성하는 효소활성을 1 U으로 한다.
□ 활성측정용 반응액 조성
| 40 mM | Tris-HCl (pH7.5) |
| 6 mM | MgCl2 |
| 10 mM | DTT |
| 2 mM | Spermidine |
| 각 0.5 mM | ATP, UTP, CTP |
| 0.5 mM | [3H]GTP |
| 0.01% | BSA |
| 1 ㎍/100 ㎕ | pSP65 DNA |
□ 순도
- 500 U의 본 효소와 1 ㎍의 λDNA-Hind III 분해물을 37℃, 16시간 반응하여도 DNA의 전기영동 패턴에 변화가 없다.
- 500 U의 본 효소와 1 ㎍의 16S와 23S rRNA를 37℃, 16시간 반응하여도 RNA의 전기영동 패턴에 변화가 없다.
- 500 U의 본 효소와 1 ㎍의 closed circular (RF I) pBR322 DNA를 37℃, 4시간 반응하여도 nicking 활성이 없다.
- 본 효소는 SDS 전기영동에 있어서, 95% 이상의 순도를 나타낸다.
□ 사용상의 주의
- 최적 pH는 7.5, Mg2+와 환원제를 요구하고, BSA와 spermidine의 첨가에 의해 활성화된다.- 사용시는 첨부 버퍼에 반드시 DTT와 BSA를 첨가할 것. 이들을 함유하지 않으면 활성화되지 않는 경우가 있다.- 최적온도는 40℃(37℃의 약 130%)로, 효소량은 300 U/ml까지, 주형량(template DNA)은 100 ㎍/ml 까지는 합성량에 대해 (+)
상관 관계를 나타낸다. 반응시간이 1시간을 초과하는 경우는 37℃가 바람직하다.- 특정영역만의 전사효율을 높이기 위해서는 그 영역의 하류에 주형 DNA를 평활 또는 5’ 돌출말단형으로 절단하는 것이 좋다.
□ 용도
- Northern hybridization과 Southern hybridization용의 표식 RNA probe의 제작- RNA splicing 반응의 전구체의 제작- Cap analog를 프라이머로 사용한 capped mRNA의 제작
