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abfrontier/Klenow片段（大片段E。大肠杆菌DNA聚合酶I）/Klenow片段（大片段E。大肠杆菌），512μU/234μl聚合酶
주문정보
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| 선택 | Cat.No. | 제품명 | 가격(VAT별도) | 수량 |
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제품특징
□ 농도
2~5 U/㎕(TaKaRa Code 2140A, 2140B)2 U/㎕(TaKaRa Code 2140AK, 2140BK)
□ 형상
(TaKaRa Code 2140A, 2140B)
| 50 mM | Potassium Phosphate (pH6.5) |
| 10 mM | 2-Mercaptoethanol |
| 50% | Glycerol |
(TaKaRa Code 2140AK, 2140BK)
| 50 mM | Potassium Phosphate (pH6.5) |
| 10 mM | 2-Mercaptoethanol |
| 50% | Ethylene Glycol |
□ 보존 -20℃
□ 첨부 Buffer 조성 (10×)
(TaKaRa Code 2140A, 2140B)
| 100 mM | Tris-HCl (pH7.5) |
| 70 mM | MgCl2 |
| 1 mM | DTT |
주의)TaKaRa Code 2140AK, 2140BK에는 반응용 버퍼가 첨부되어 있지 않습니다.
□ 기원
Escherichia coli carrying the plasmid which encodes the gene of Klenow fragment
□ 제품설명
본 효소는 주형, 프라이머(DNA, RNA 모두 가능) 존재하에서 dNTP를 기질로하여, 주형에 상보적인 DNA를 5’→ 3’방향으로 합성한다.본 효소는 E. coli DNA Polymerase I에 DNA 공존하에서 subtilisin을 처리하면 5’→ 3’exonuclease 활성을 갖는 N-말단 유래 분자량 35,000의 소단편과, 5’→ 3’DNA polymerase 및 3’→ 5’exonuclease 활성을 갖는 C-말단 유래 분자량 68,000의 큰 fragment이 형성된다. 이 큰 fragment가 Klenow Fragment이다. TaKaRa의 Klenow Fragment는 대장균의 DNA polymerase I의 구조 유전자 pol A 개시 코돈으로부터 하류 약 1,000 bp을 결실한 단편을 대장균에 cloning하여 생산하고 있다. 따라서 3’→ 5’exonuclease 활성은 포함하나 5’→ 3’exonuclease 활성은 포함하지 않는다.또한 TaKaRa Code 2140AK, 2140BK는 Kilo-Sequence용 Deletion Kit (TaKaRa Code 6030)용으로 농도를 조정한 것으로, 형상 조성의 일부를 클리세롤에서 에틸렌글리콕으로 바꾸어 sequence gel 전기영동 시 비틀어짐이 없이 깨끗한 전기영동을 얻을 수 있도록 한 것이다.
□ 활성의 정의
Poly d(A-T) 합성 DNA를 주형/프라이머로 하여 37℃, pH7.4에서, 30분 동안 모든 10 nmol의 nucleotide를 산불용성 침전물로 바꾸는 효소활성을 1 U으로 한다.
□ 활성 측정용 반응액 조성
| 67 mM | Tris-HCl (pH7.4) |
| 6.7 mM | MgCl2 |
| 1 mM | 2-Mercaptoethanol |
| 20 μM | 기질 DNA |
| 33 μM | dATP |
| 33 μM | [3H]dTTP |
□ 순도
- SDS전기영동에서 95% 이상의 순도를 나타낸다.- 10 U의 본 효소와 1㎍의 closed circular (RFI)фX174 DNA를 37℃, 1시간 반응하여도 DNA의 전기영동 패턴에 변화가 일어나지
않는다.
□ 사용상의 주의
- 희석에 의해서는 실활되지 않으나 심하게 교반하면 실활할 수 있다.- 5’ →3’Exonuclease 활성이 포함되어 있지 않으므로 nick translation 활성을 나타내지 않는다. 그러므로 이중가닥 DNA 말단과
gap의 수복에 적당하다.- DNA polymerase I 과 같이 ddNTP를 저해없이 기질로 사용한다.- T4 DNA polymerase에 비해, 주형 DNA의 고차구조에 대한 저항성이 높다(고차구조의 영향을 덜 받는다).
- DNA에 대한 친화성이 강해 과량을 사용하면 aggregation이 생겨 반응이 저해받을 수 있다.
- 5’말단의 수식에 사용하면, filling 후에 1염기를 여분으로 부가하는 경우가 있다.
□ 용도
- Dideoxy법에 의한 염기서열 결정 (sequencing, Sanger법)이용도에는 특히 TaKaRa Code 2140AK, 2140BK가 적당하다.
- 이중가닥 DNA말단의 평활화
-Oligonucleotide directed mutagenesis에 있어서 이중가닥 DNA의 합성
- Random 프라이머를 사용하여 DNA 표식
