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abfrontier/DNA Polymerase I (E. coli )/DNA Polymerase I（E. coli）, 500 U/2130B
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| 선택 | Cat.No. | 제품명 | 가격(VAT별도) | 수량 |
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제품특징
□ 농도 3~6 U/㎕
□ 형상
| 50 mM | Potassium Phosphate (pH6.5) |
| 10 mM | 2-Mercaptoethanol |
| 50% | Glycerol |
□ 보존 -20℃
□ 첨부 Buffer 조성 (10×)
| 500 mM | Tris-HCl (pH7.8) |
| 100 mM | MgCl2 |
| 1 mM | DTT |
| 250 ㎍/ml | BSA* |
*BSA가 침전될 우려가 있으므로 동결· 융해는 가능한 피한다.
□ 기원
Escherichia coli carrying the plasmid which encodes the gene of Pol I
□ 제품설명
본 효소는 주형, 프라이머(DNA, RNA 모두 가능) 존재하에서 dNTP를 기질로 하여, 주형에 상보적인 DNA를 5’→ 3’방향으로 합성한다. 이중가닥 특이적 5’→3’exonuclease 활성 및 단일가닥 특이적 3’→ 5’exonuclease 활성도 가진다.
□ 활성의 정의
Poly d(A-T)합성 DNA를 주형/프라이머로 하여 37℃, pH7.4에서, 30분 동안 모든 10 nmol nucleotide를 산불용성 침전물로 바꾸는 효소 활성을 1 U으로 한다.
□ 활성측정용 반응액조성
| 67 mM | Potassium phosphate (pH7.4) |
| 6.7 mM | MgCl2 |
| 1 mM | 2-Mercaptoethanol |
| 20 μM | 기질 DNA |
| 33 μM | dATP |
| 33 μM | [3H]dTTP |
□ 순도
- SDS 전기영동에서 90% 이상의 순도를 나타낸다.- 10 U의 본 효소와 1㎍의 closed circular (RF I)фX174 DNA를 37℃, 1시간 반응하여도 DNA의 전기영동 패턴에 변화가 일어나지
않는다.
□ 사용상의 주의
- 상기 보존조건에서 6개월 이상 안정하고 희석에 의한 활성저하는 일어나지 않으나, 심하게 교반하면 실활할 수도 있다.- Endonuclease를 포함하고 있지 않으므로 단독으로는 거의 nick translation 활성은 나타내지 않는다.- DNA와 친화성이 강하기 때문에 과량을 사용하면 aggregation이 일어나 반응이 충분히 진행되지 않는 경우가 있다.
□ 용도
- DNase I (TaKaRa Code 2210)과의 병용에 의한 nick translation- Okayama-Berg법에 있어서 second strand의 합성반응 (DNA polymerase I 0.3 ㎍은 약 2.5 U에 상당한다).
