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| 선택 | Cat.No. | 제품명 | 가격(VAT별도) | 수량 |
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제품특징
□ 제품설명
● 심근 세포의순도 95%이상(cTnT양성률)
● 항생제 선별과정없이 심근 세포 선별
● 자율 박동능력을 보유
● 각종 이온통로 유전자를 발현(SCN5A, KCNQ1, CACNA1C, KCNH2등)
● 각종 이온통로 차단제(E-4031, Chromanol 293B, Verapamil, Mexiletine)에 대한전기 생리학적 반응성
MiraCellCardiomyocytes(from ChiPSC12)는 인간 iPS세포에서 유도한고순도 심근세포이며 심근 세포의 성상과 기능 해석 등에 사용 가능하다. 또한 심근세포의 생리기능의 해석뿐만 아니라 MEA(Multi-electrode array)시스템 등을 이용한 여러 약제에 의한 심장독성 시험 등에 대해서도 폭넓게 사용할 수 있다.본 제품은 교토 대학 iPS세포 연구소의 연구 개발된 인간 심근 세포의제작 기술을 Takara Bio가 iHeart Japan㈜으로부터도입하여 공동 개발한 제품이다. 본 심근세포 제작 기술은 심근 특이적 프로모터(α-MHC등)를 이용한 항생제(예: puromycine 등) 선별 과정 없이 고순도의 심근 세포를 만들었다. 그러므로 장기간의 배양 시 일반적으로 발생하는 순도의 저하가 일어나지 않는다.90일간 배양 후에도 순도의 저하가 관찰되지 않았다(논문 투고 중).본 제품의 제조에 사용된 human iPS cell line ChiPSC12(CodeY00285)은 feeder-free 배양 조건인 CellartisDEF-CS 500 Culture System(Code Y30010)으로 배양되었다.본 제품에는 세포와 인간 ES/iPS세포 유래 심근 세포 융해용 배지(MiraCell CM Thawing Medium), 심근 세포 배양용 배지(MiraCellCM Culture Medium)이 들어갔다.
□ 내용
MiraCell Cardiomyocytes (from ChiPSC12) | vial, 1 tube | ＞3 x 106 cells |
MiraCell CM Thawing Medium | 1 bottle | 20 ml |
MiraCell CM Culture Medium | 1 bottle | 100 ml |
□ 수송
-80 ℃
□ 보관
MiraCellCardiomyocytes(from ChiPSC12): 액체 질소 보존 받은 즉시 액체 질소에 보관하세요.액체 질소 보존이 불가능하면 바로 세포를 융해하여 배양하세요.MiraCellCM Thawing Medium, MiraCell CM Culture Medium: -20℃이하, 융해 후 4℃ -20℃ 이하에서 동결 보존하고 사용 전에 4℃에서 overnight으로 배지를 해동을 하세요융해 후에는 4℃에서 보존하고MiraCell CM Thawing Medium은 1주일 이내, MiraCell CM Culture Medium는 1개월 이내 사용하세요(다시 동결 융해는 불가).
□ 사용 상의 주의
MiraCell Cardiomyocytes(from ChiPSC12)Kit는 iHeart Japan㈜로부터 라이선스를 받고 Takara Bio가 제조, 판매하고 있습니다.
그림1. MiraCell Cardiomyocytes(from ChiPSC12)의 lot간 차이(3 lot 제품)의 확인 A) 심근 마커cTnT(Cardiac TroponinT)양성률(해동 2일째)비교 결과B) 해동 직후 및 해동2일째 생존세포 수 비교 결과C) MED Probes(Alpha MEDScientific Inc.)에서 FPDcF(Field potential durationcorrected by Fridericia"s formula)의
비교 결과 ※BPM35이상의Probe를 사용D) 각 lot의 IKr 저해제 (E-4031)에 의한FPDc10 (FPDcF가 10% 더 연장할 때 약제 농도) 비교결과 어느 평가 방법에서도 lot 간 차이는 적은 것으로 확인됐다.
그림2. MiraCell Cardiomyocytes(from ChiPSC12)을 이용한 약제 반응성 시험 해동한 후의 심근세포를 MED Probes(Alpha MEDScientific Inc.)에 파종 후4~9일째에 BPM(Beats per Minute)이35 이상을 나타내는 Probe에 대해 세포 외 전위 측정장치를 이용하여 약제 반응성을 확인했다. IKr저해제(E-4031), IKs억제제(Chromanol 293B), Na채널 및 IKr저해제(Mexiletine)에 대해서는 FPDcF의 연장, Ca채널 저해제인 Verapamil에 대해서는 FPDcF의 단축이 확인됐다. 또한 E-4031 및Mexiletine에 관해서는 고농도시 부정맥 형태의 파형(EAD/TA; Early afterdepolarization/Triggered activity)이 관찰됐다.
그림3. MiraCell Cardiomyocytes(from ChiPSC12) 심근 결합 단백질의 발현 해석 Fibronectin으로 코팅된 배양 플레이트로 계대한 해동 후의심근 세포를 4% paraformaldehyde로 고정하고 각 단백질에 특이적인 항체를 이용하여 염색했다. 그 결과 거의 모든 세포에서 심근 마커 단백질 cTnT가 발현하는순도 높은 심근세포임이 확인되었다(좌측). 또 MLC2A와 MLC2V의 염색상에서MiraCell Cardiomyocytes(from ChiPSC12)는 대부분의 세포에서 심실 근육 세포 마커인 MLC2V가 발현하는 것을 확인했고(중앙). α-actinin염색으로 특징적 근절 구조가 확인되었다(우측). 그 외 각종 이온 통로 유전자의 발현(SCN5A, KCNQ1,CACNA1C, KCNH2등)에 대해서도 확인했다(데이터비공개).
