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제품특징
□ 제품설명
GS2-M 배지는 2 종류의저분자 억제제 (small molecule inhibitor, CHIR99021, PD0325901 ="2i") 존재하에서 마우스 ES 세포주, iPS 세포주를제작하기 위해 제조된 화학적 성분이 알려진 무혈청(serum free) 배지이다. CHIR99021, PD0325901은 각각 GSK3β 또는 ERK / MEK의 분화 유도 신호를 억제하는 효과를 가지고 있으며, 세포의 생존을 촉진한다. 마우스 partial iPS 세포 나 pre-iPS 세포를 완전한 다능성 iPS 세포로 변환하기 위해 LIF를 첨가하는 것도 가능하다.
Native한 groundstate 마우스 다능성 줄기 세포의 장기간의 유지는 GS2-M 배지에서만 가능하다.2i 억제제는 최근 생식 계열로 분화 가능한 ES 세포를 얻기 어려웠던 마우스 종에서 유도와, naive한 사람과가축 iPS 세포를 제작하는 목적으로도 사용할 수 있게 되었다.
Figure 1. GS2-M 배지에서 높은 Ground state 유지 가능.mES 세포의 Ground state 다능성 마커인 Rex-1 GFP 발현을 유동 세포 계측 분석 70%이상 GFP 양성 세포 발현확인, GS2-M 배지 내 고효율Ground state 유지 확인Nat. CellBiol. (2011) 13, 838-845.
Figure 2. GS2-M 배지를 이용 chimeric mice 제작 고효율 가능. GS2-M 배지를 이용하여 mES 세포 1주일 배양 이후 mouseblastocyst 주입 결과 100% black mouse 제작 고효율 확인.*Dr. Sakimura and Dr.Abe, Brain researchinsititute, Niigata Univ제공
□ 내용
● GS2-M media100 ml
● 2i supplement (DMSO 함유) 100 μl
□ 보존
● GS2-M media : -20 ℃
● 2i supplement : -80 ℃
(융해 후 4 ℃에 보관하고 2 주일 이내에 사용)
□ 배지 조제 방법
1. 2i supplement 100 μl를 실온에서 해동 (5 분 이내) 빠르게 스핀 다운한다.2. 2i supplement 전량을 미리 보온한 배지에 첨가하여 완전히 균일하게 될 때까지 혼합한다. Reprogramming phase 또는 복제한 마우스의 iPS 세포의 파종에 이용하는 경우에는 LIF(10 ng/ml)를 준비된 GM2-M 2i
배지에 첨가한다. 필터 멸균은 피한다.
□ 본 제품 이외에 필요한 시약
A. mouse ES와 iPScellsPBS에 0.1% gelatintype A로 코팅(실온에서 15분 이상)한 배양 용기 또는 0.01% poly-L-ornithinehydrobromide(37℃에서 30분 이상)로코팅 후 PBS로 2회washing하고 PBS에 10 μg/mL laminin(37℃에서 3시간 이상)으로 순차적으로 코팅한 용기B. human iPS cells.자세한 내용은 Wang W, et al. (2011) 문헌을 참고바랍니다.Wang W, et al . (2011) Rapid and efficientreprogramming of somatic cells to induced pluripotent stem cells by retinoicacid receptor gamma and liverreceptor homolog. PNAS (USA) . 108(45):18283-18288.
