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제품특징
□ 특징
● 각종 DNA 메틸화 해석시 각각 positive/negative control DNA로 사용
● Methylated DNA는 CpG Methylase에 의해 고도로 메틸화된 HCT116 gDNA
● 메틸기 전이효소를 Knockdown 시킨 세포주에서 조제한 Unmethylated DNA는 지극히 낮은 메틸화 레벨을 보임
□ 제품설명
DNA 메틸화의 해석은 최근 주목받고 있는 Epigenetics(후성유전학) 해석의 한 영역이며, 동물에서는 CpG 서열의 시토신(cytosine)이 메틸화 되는 것으로 알려져 있다. 특히 유전자 프로모터 영역의 CpG island는 메틸화 상태가 유전자 발현 제어에 관여하고 있는 경우가 있어, 주요한 해석 대상 영역이 되고 있다. 해석에는 bisulfate sequencing 등 여러 가지 수법이 이용되고 있다.EpiScope Methylated HCT116 gDNA(Code 3522)는 HCT116 세포(Human colon cancer cell line) 유래의 게놈 DNA를 CpG methylase를 이용해 고도로 메틸화한 것이다. 여러가지 DNA 메틸화 해석에 사용 가능하고, positive control(고메틸화 DNA)로 사용할 수 있다.EpiScope Unmethylated HCT116 DKO gDNA(Code 3521)는 DNMT1(DNA methyltransferase1)과 DNMT3B(DNA methytransferase3B)를 Double knockout시킨 HCT116 세포 유래의 게놈 DNA이며, wild type HCT116 세포 유래의 게놈 DNA와 비교해 메틸화 레벨은 지극히 낮다.(5%미만)
*본 DNA는 다양한 DNA 메틸화 해석에 대해 negative control(비메틸, 저메틸화 DNA)로서 사용할 수 있다.*본 제품은 유전자를 변형한 HCT116 세포주에서 조제한 게놈 DNA이므로, DNA 메틸화 상태등 자세한 것은 제품 lot마다 다를 수
있습니다.
□ 용도
아래의 각종 메틸화 DNA 해석방법의 positive control (고메틸화) (사람 유래 DNA, Code 3522) 또는 negative control (비메틸, 저메틸화)(사람 유래 DNA, Code 3521)로 사용한다. - Bisulfite Sequencing- Combined Bisulfite Restriction Analysis (COBRA)- Methylated CpG Island Recovery Assay 등
□ 보존
- 20℃
□ 농도
100 ng/㎕
□ 형상
10 mM Tris-HCl(pH8.0)1 mM EDTA
□ 기원 및 조제법
EpiScope Methylated HCT116 gDNA:사람 HCT116 세포로부터 추출· 정제 된 게놈 DNA를 CpG methylase(M.Sss I)로 메틸화해, 페놀/클로로포름 추출 및 에탄올 침전에 의해 정제EpiScope Unmethylated HCT116 DKO gDNA:사람 DNMT DKO HCT 116 세포로부터 추출· 정제 한 게놈 DNA
□ 품질
● EpiScope Methylated HCT116 gDNA 사람 유전자 MLH1 및 GAPDH의 CpG island 영역의 bisulfite sequencing에 의해, CpG 배열의 95%이상이 메틸화 되어
있는 것을 확인하였다.
● EpiScope Unmethylated HCT116 DKO gDNAEpiScope Promoter qPCR Array (Human)에 탑재되어 있는 25 유전자의 메틸화 레벨에 대해EpiXplore Methylated
DNA Enrichment Kit에 의한DNA 메틸화 영역 농축과 2×SYBR Premix EX Taq GC를 이용한 qPCR로 해석하여,
어느 쪽의 유전자에 대해서도 저메틸화 상태인 것을 확인하였다.