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제품특징
□ 특징
● Bradford 방식의 Protein assay Kit
● 간단한 조작으로 빠르게 넓은 범위, 1~ 1,000 μg/㎖, 단백질 정량 가능
□ 제품 설명
TaKaRa BradfordProtein Assay Kit는 coomassie dye를 사용하는 Bradford 방식의제품으로, 간단한 방법으로 신속하게 1~1,000 μg/㎖의 단백질 농도를 정량할 수 있다. 본 제품은 Coomassie dye가 단백질과 결합할 때 흡광도가 변하는 원리(465nm→595nm)를 이용한다. 이 변화는 용액 내의 단백질의 양과 비례하기때문에, 585nm의 흡광도를 측정하여 용액의 단백질 농도를 정량할 수 있다. 단백질과 색소 복합체는 반응 시작 후 5분에서 최대 60분까지 안정하다. 본 제품은 샘플에 환원제가 존재하여도측정 가능하지만, 계면활성제가 존재한다면 정량값이 부정확하게 되므로 주의가 필요하다
(공존물질에 의한 영향에 대해서는 <표.1> 참조).또한 단백질에 따른 발색률이 다르기때문에 주의해야 한다 (다양한 단백질의 발색 비교는 <표.2> 참고).
□ 내용
본 제품은 1 ㎖ 반응 시 500회, Microtiter plate를 이용한 200 ㎕ 반응 시 2,500회의 측정을 할 수 있다. Low-concentration 프로토콜을 이용하면 1 ㎖ 반응 시 1,000회, 200 ㎕ 반응 시 최대 5,000회의 측정이 가능하다.
| 1. Bradford Dye Reagent | 250 ㎖×2 |
| 2. BSA Standard Solution (2 mg/㎖)* | 1 ㎖×10 |
□ 보존
4℃, 냉장 보관 하십시오.
□ 제품 이외에 필요한 것
● Spectrophotometer and compatible 1 ㎖ cuvette
● Microplate reader and compatible microplate
● Benchtop centrifuge
● Microtubes (2 ㎖ or 1.5 ㎖)
● Spectrophotometer or microplate reader
□ 단백질 정량 샘플에 공존 물질에 의한 영향
본 제품은 환원제에 의한 영향은 적게 받지만, 높은 농도의 계면활성제는 측정에 영향을 끼친다. <표. 1>은 측정에 영향을 끼치지 않는 공존물질의 농도를 나타낸 것이다.<표. 1>에는 측정에 영향을 주지 않는 농도를 표기하였다.<표. 1> 단백질 정량 샘플의 공존물질 허용 농도
□ 단백질 종류에 따른 영향
단백질과 색소의 결합은 주로 단백질 중 염기성 아미노산 또는 방향족 아미노산과 색소의 결합 (특히아르기닌과의 결합)에 의한 것이므로 단백질 종류에 따라 발색률이 다르다. <그림. 1>은 일반적인 표준물질로 사용되는 BSA (Bovine Serum Albumin)와 BGG (BovineGamma Globulin)의 표준 곡선이다. 또한<표. 2>에는 15종류의 단백질을 BSA의 발색률과 비교하여 나타내었다.
<그림. 1> BSA와 BGG의 표준곡선<표. 2> BSA에 대한 다양한 단백질의 발색률 비교
*Ratio: (각종 단백질의 흡광도 평균값) / (BSA의 흡광도의 평균값)
