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제품특징
□ 제품설명
MightyAmp DNA Polymerase는 특히 2 kb정도까지의 짧은 단편을 증폭하는데 있어서 높은 반응성을 가지는 신규 DNA Polymerase이다. 본 효소의 강력한 증폭 능력에 의해 일반적인 PCR 효소에서 증폭이 곤란한 PCR 저해 물질을 많이 포함하는 crude 생체 추출액으로부터 PCR 증폭이 가능하다. MightyAmp DNA Polymerase Ver. 2 에서는 기존의 MightyAmp DNA Polymerase에 개량된 buffer를 조합하여 혈액, 동식물 조직 등의 생체 시료를 직접 반응액에 첨가하는 「Direct PCR」이 가능하게 되었다. 기존의 MightyAmp DNA Polymerase와 같이 PCR저해 물질을 많이 포함한 crude 생체 추출액으로부터 PCR 증폭뿐만 아니라 GC rich, AT rich 서열에 관계없이, 광범위한 타겟의 증폭이 가능하게 되었다. 소량의 주형으로부터의 증폭에서도 양호한 반응성을 나타낸다. 또한 98 ℃까지 polymerase 활성을 억제하는 강력한 monoclonal 항체를 이용하여 hot start PCR이 가능하다.
□ 내용 (200 회*1)
| MightyAmp® DNA Polymerase Ver.2 | 200 ㎕ | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 2× MightyAmp Buffer Ver. 2 (Mg2+, dNTP plus)*2 | 1 ㎖ x 5 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
*1 50㎕ PCR 반응시 용량 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
*2 4mM Mg2+, 800 μM dNTP 포함 □보존 -20℃□일반적인 PCR 반응액 조성 (total 50 ㎕)
*1 아래 표를 참조
*1 EDTA 또는 heparin을 처리한 혈액을 사용한다.Citric acid (구연산)을 처리한 혈액을 이용하면 반응성이 현저하게 저하되므로, Direct PCR에서는 추천하지 않는다. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
□ Primer 설계
primer는 가능한 primer 설계 소프트웨어를 이용하여 최적인 배열을 선택하고, Tm값*이 60℃ 이상이 되도록 설계하는 것을 추천한다. *Tm값 (℃)=[(nA+nT)×2]+ [(nC+nG)×4]-5MightyAmp DNA Polymerase의 경우 이노신 (inosinic acid)을 포함하는primer의 사용은 피한다.
□ PCR 증폭조건
Extension 온도 68℃에 3 step PCR이 표준조건이고, 증폭길이가 2 kb이상이거나 GC rich 서열을 증폭하는 경우는 2 step PCR을 권장한다.
[3 Step PCR]
| 98 ℃ | 2 min. * 1 | |
| ↓ | ||
| 98 ℃ | 10 sec. | ┐ |
| 60 ℃ | 15 sec. | │ 30~40 cycles |
| 68 ℃* 2 | 1 min. / kb | ┘ |
[2 Step PCR]
| 98 ℃ | 2 min. * 1 | |
| ↓ | ||
| 98 ℃ | 10 sec. | ］30~40 cycles |
| 68 ℃ | 1 min. / kb |
*1 강력한 Hot start Antibody를 포함하므로, 98℃, 2분의 pre-denaturation과정이 필수임.*2 3 step PCR의 경우도 extension온도는 68℃로 설정해 주십시오.
□ PCR산물
MightyAmp DNA Polymerase를 이용해서 증폭한 PCR산물의 대부분은 3’ 말단에 A가 1염기 부가되어 있다.
